本研究对芍药根中淀粉酶活性以及可溶性糖含量的动态变化进行考察， 结合芍药苷含量变化规律 ， 为确定最佳采收期提供依据。‍

1 材料与试药1． 1 材料 江苏省南京市溧水县柘塘镇新鲜三年生芍药， 经周立良副教授鉴定为毛茛科植物芍药 P ．1acti f l o—r a 。除去表面泥土， 每份样品各自切碎后混合均 匀 。1． 2 仪器与试剂LC 一 10A 高效液相色谱仪； SPD 一 10A 紫外一 可见光检测器 ； R 一 6A 数据处理机 (均为日本岛津公司) 。紫外一 可见分光光度计 756CR T (上海精密科技仪器公司)； TDZ5 多管架自动平衡离心机(长沙湘仪离心机仪器有限公司)。芍药苷对照品 (中国药品生物制品检定所 ， 批号 0736-2000 14 )。麦芽糖为分析纯(上海慧兴生化试剂公司， 批号 2004041 1 ， 纯度 > 1 98． 5％)。蔗糖为分析纯 (汕头西陇化工厂， 批 号 0411122 ， 纯 度 ≥99． 9％)。可溶性淀为分析纯(上海实亿化试公司 ， 批号 20040 128 )。水为自制超纯水 ， 甲醇分析纯 (上海九亿化试公司) ， 甲醇色谱 纯(淮阴汉邦)， 其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果2． 1 淀粉酶活性2． 1． 1 反应用试剂的制备 DNS 的制备： 精确称 取 5． 0 g 3 ， 5． 二硝基水杨酸 ， 溶于200 m L 的 2 m o] · L 氢氧化钠溶液中， 作为溶液 1。称取 130 g酒石酸钾钠 ， 用蒸馏水定容至 500 m L ， 作为溶液 2。合并溶液 1 和溶液 2 ， 加入 5 g 苯酚和5 g 亚硫酸钠 ， 加水 定容至 1 L ， 暗处保存备用。 麦芽糖标准溶液的制备： 精确称取 1． 0 g 麦芽 糖， 加水溶解， 定容至 100 m L 后， 置于冰箱中4 a I =保 存 1 周 ， 若出现絮状弃之重配 J。 淀粉溶液的制备： 精密称取 1． 0 g 淀粉， 置于烧杯 中摇匀， 缓慢加热至透明后， 加水定容至 100 m L 备用。2． 1． 2 标准曲线的制备分别取 1 m g · m L 麦芽 糖标准溶液 0． 2 ， 0． 4 ， 0． 6 ， 0． 8 ， 1． 0 m L ， 加蒸馏水至2 m L ， 再分别加入 DN S 溶液 2 m L ， 各管混匀 ， 置于沸水浴中 5 m in ， 冷却后加入蒸馏水定容至 25 m L ， 以蒸馏水为空白对照 ， 测定波长 520 nm 处 的吸光值。麦芽糖标准品质量在 0． 2 ～1． 0 m g 呈线性关系。将 5 次结果进行回归分析 ， 回归方程 Y = 0． 573 5X + O． 000 5 ， 相关系数  = 0． 993 5 。2． 1． 3 淀粉酶液的提取新鲜芍药根 2． 5 g， 洗 净， 切碎混匀， 加入少量蒸馏水和石英砂 ， 在冰浴中研磨至浆状后 ， 转入离心管 ， 3 000 r ·m in 条件下 离心 30 m i n 。取上清液过滤 ， 滤 液定容至 100 m L ， 作为酶提取液备用。2． 1． 4 Ot， 口 一 淀粉酶的总活性测定取酶提取液 1 m L ， 加入 1 m L pH 5． 6 柠檬酸缓冲溶液和 2 m L 1％ 淀粉水溶液， 混匀。4O a I =水浴 15 mi n 后 ， 再加入 2 m L 预热的1％淀粉溶液。4o a I =水浴 5 mi n， 迅速加人 0． 4 m o] · L 氢氧化钠溶液终止反应 ， 作为待测液备用。取 1 m L 上述待测液 ， 加入 1 m L 蒸馏水和2 mL DNS 溶液， 混匀， 置于沸水浴中5 m i n， 冷却后加入蒸馏水定容至 50 m L 。以蒸馏水为空白对照 ， 测定波长520 nm 处的吸光值 。 以 4o a I =时 ， pH 5． 6 条件下 ， 每分钟水解淀粉生 成 1 m g 麦芽糖所需的淀粉酶量作为 1 个酶 活性单 位 。 重复测定 3 次 ， 结果见表 1。 表 1 不同采集期芍药根中淀粉酶活性m g ·g 一 ·m l 。 n 一2． 1． 5  Ot． 淀粉酶的活性测定  取酶提取液 1 m L ，7O a I =水浴 15 mi n 灭活 ． 淀粉酶， 迅速冷却后， 其余操作同2． 1． 4 项下。 ． 淀粉酶总活性 = O t， J B- 淀粉酶总活性 一Ot ． 淀粉酶活性。2 ． 2 可溶性糖含量测定2． 2． 1 蔗糖标准溶液制备精确称取 1． 0 g 蔗糖， 少量水溶解 ， 加 入 0． 5 m L 浓硫酸 ， 蒸馏水定容 至100 m L 。吸取上述 蔗糖对照品溶液 1 m L 加入 100 m L 量瓶中， 加水定容至刻度 。2 ． 2 ． 2 标准曲线的制备分别取 100 X 10 ～g · L 的蔗糖标准溶液 0． 2 ， 0． 4 ， 0． 6 ， 0． 8 ， 1． 0 m L ， 加 入蒸馏水至 2 m L 。再按顺序分别加入 9％苯酚溶液1 m L ， 摇匀 ， 从管液正面以 5 ～20 s 缓慢加 入 5 m L浓硫酸， 摇匀。室温下放置 30 mi n， 冷却后在波长485 nm 处 比色测吸光度。蔗糖对照品质 量在 20 X 1O ～～100 X 10 g 呈 线性关 系。回归方 程 Y = 0 ． 00 9 1X + O ． 07 8 0 ， R = O ． 999 2 。2． 2． 3 可溶性糖的提取准确称取新鲜芍药根约0． 1 g， 磨碎。转入试管中 ， 加蒸馏水 10 m L ， 于沸水浴中提取 2 次， 每次 30 mi n。提取液过滤合并， 定容 至 50 m L 量瓶中 ， 做样品液备用 。2． 2 ． 4 可溶性糖的显色及测定 吸取 0． 5 m L 样品液于试管中 ， 加蒸馏水 1． 5 m L ， 按顺序加入 1 m L 苯 酚， 5 m L 浓硫酸 ， 摇匀 。室温下放置 30 m in ， 在波长485 nm 比色测吸光度。结果见表 2。2． 3 芍药苷含量测定·  不同采集期芍药根中芍药苷 ， 可溶性糖质量分数  ％2． 3． 1 色谱条件 Shim adzu V P —OD S —C 】 8柱 (4． 6 m m × 250 m m ， 5 m ) ， 柱前加装 C 。 保护柱 ； 流动相甲醇一 水 (25： 75 ) ； 流速 1． 0 m L ·m in ～； 检测波长230 nm ； 灵敏度 0． 01 A U FS ； 柱温为室温 ， 使芍药苷的出峰时间为 25 ～ 30 m i n 。在上述色谱条件下样品中芍药苷与其他组分分离效果较好。2． 3． 2 供试品制备取新鲜芍药根 ， 分离栓皮后称取 1． 5 g ， 适当粉碎 ， 加适量甲醇浸渍 48 h ， 浸渍液过滤 ， 残渣加入以适量甲醇 ， 加热提取 30 m in， 提取液过滤 ， 合并 2 次浸提液 ， 定容至 25 m L。取定容后提取液 0． 5 m L ， 稀释至 10 m L ， 0． 45 m 微孔滤膜过滤后， 作为待侧样品溶液。进样量 8 L， 每个月共测定 10 份， 取平均值 。

3 讨论 淀粉酶广泛存在于各种植物 ， 分为和 2 种催化亚型。  淀粉酶不耐酸， 在 pH 3． 6 以下迅速钝化； 淀粉酶不耐热 ， 在 70 ℃下， 15 m in 被钝化。故本实验采用李雯所报道的改进方法测定淀粉酶活性。 本研究显示芍药根中淀粉酶活性及其分解产物可溶解性糖的变化与芍药生长的生理周 期十分吻合， 6 月至9 月叶片、 茎段仍能进行光合作用提供能 量； 但高温不利于糖分的积累 J。所以该时期可溶性糖含量并不高。随地上部分逐渐枯萎， 可溶性糖含量缓慢上升。10 月 ，11 月 ， 此时地上部分已枯萎 ， 温度降低， 对于根部的养分供应暂停， 淀粉酶活性与可溶性糖含量迅速增高 ， 以抵御低温可能带来的胁 迫以及保证新根的生长。故此时含量达到实验期内的最大。12 月、 1 月， 芍药已完全进入休眠期， 部分· 954 ·糖分被新根生长所消耗 ， 故此时根中可溶性糖含量和淀粉酶活性均开始降低。 淀粉酶只有在种子萌发和出苗时期比较活跃。但芍药根中 7 月和 ll ～12 月份 淀粉酶活性有升高 ， 与报道芍药出苗期间的活性水平相似 ， 显示芍药根内可能有不同的生理机制启动 ， 因此这一时期不适宜作为芍药的采收期。具体原因有待进一步实验考察 。 芍药苷含量总体变化不大 ， 分别在 7 月和 12 月初出现 2 个高值。其他文献报道芍药苷5 月份初花期出现最大值。

从芍药生理周期来看 ， 芍药苷含量似与芍药根的干物质积累成反比。 传统认为芍药一般在栽植 3 ～ 4 年后采收 ， 收获期多为 8 ～ 9 月 。本实验中 ，芍药苷在 7 月 ～12 月出现高值，但此时淀粉酶活性有升高，不适宜采收。而 10 月可溶性糖含量出现突然增大 ， l1月底 ～12 月初到达最高 ， 此时采收芍药中淀粉大量转化 ， 粉性不足 ， 且水煮过程中可溶性糖损失过大会导致得率降低。因此芍药采收不宜晚于 10 月。而此时期内芍药苷含量却呈现轻微下降趋势。综合上述变化 ， 建议芍药的收获期在其自然倒苗后 9 月 中 旬至 10 月上旬为宜 。